CASPASE-3活性檢測(cè)試劑盒
Caspase-3是凋亡過(guò)程中Z主要的終末剪切酶，因而也是研究Z多的caspase，它激活pro-caspase-2,6,7,9等，特異水解多種凋亡關(guān)鍵蛋白如PARP，介導(dǎo)細(xì)胞核染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。試劑盒測(cè)定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide (Ac-DEVD-pNA)，釋放硝基苯胺pNA。
Caspase-3是凋亡過(guò)程中zui主要的終末剪切酶，因而也是研究zui多的caspase，它激活pro-caspase-2,6,7,9等，特異水解多種凋亡關(guān)鍵蛋白如PARP，介導(dǎo)細(xì)胞核染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。試劑盒測(cè)定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide （Ac-DEVD-pNA），釋放硝基苯胺pNA。游離硝基苯胺pNA呈黃色在405 nm具有zui大吸收峰，用普通可見(jiàn)光分光光度比色方法測(cè)定。根據(jù)pNA標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算來(lái)自底物肽釋放的pNA濃度，得到Caspase-3水解活性。反應(yīng)體系100微升，試劑盒提供的試劑，除標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)外可進(jìn)行50或100次樣品測(cè)定。
適用：測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-3活性。
組成與儲(chǔ)存：
1. 裂解緩沖液： 30 ml ，4 ºC
2. 反應(yīng)緩沖液： 20 ml ，4 ºC
3. 2 mM Ac-DEVD-pNA底物： 0.5 ml，－20 ºC避光
4. 10 mM pNA標(biāo)準(zhǔn)品： 0.5 ml，－20 ºC避光
以上標(biāo)出的量為100次檢測(cè)，50次檢測(cè)的試劑量減半。試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲(chǔ)存，1年內(nèi)穩(wěn)定。
所需儀器：
酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板；或可見(jiàn)光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。
工作波長(zhǎng)：zui大吸收波長(zhǎng)405 nm，如不具備也可在400~450 nm范圍內(nèi)測(cè)定。
