北京諾博萊德科技有限公司

 　　DNA提取是Qiagen試劑盒的一大經(jīng)典應用，之前的文章中我們有介紹過Qiagen試劑盒提取總RNA的操作過程，本文介紹下Qiagen試劑盒用于提取DNA的準備工作。

　　Qiagen試劑盒適用于使用微型離心機或真空處理從全血、血漿、血清、血沉、淋巴細胞以及體液樣品中提取總(基因、線粒體和病毒)DNA。該試劑盒可處理帶有EDTA、檸檬酸鹽和肝素等常規(guī)抗凝劑的新鮮或冷凍的全血樣本，樣品量可達200μl。整套基因組的操作時間約為20–40分鐘，一般可從200μl健康全血中獲得4–12 μg DNA，洗脫體積可在50–200μl范圍。

　　Qiagen試劑盒的抽提原理：

　　樣品中的DNA可以特異性結(jié)合到QIAamp的硅膠膜上，通過兩次洗滌可以將PCR抑制劑，如：二價陽離子和蛋白*去除，zui后結(jié)合在離心柱上的純核酸可用水或試劑盒中的緩沖液進行洗脫收集。

　　Qiagen試劑盒提取DNA開始前的準備工作：

　　1. 將樣品平衡到室溫(15-25℃);

　　2. 將水浴或是金屬浴加熱到56℃，以備第4步使用;

　　3. 將Buffer AE或蒸餾水平衡到室溫，用于第11步的洗脫;

　　4. 確保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋白酶已經(jīng)按照說明配置完畢;

　　5. 如果在Buffer AL中出現(xiàn)沉淀物，請在56℃孵育使其溶解。

　　開始前的注意事項：

　　1. 所以的離心步驟需要在室溫(15-25℃)進行;

　　2. 如果樣品中含有的基因組當量少于10000，請?zhí)砑虞d體DNA(carrier DNA);

　　3. 200μl全血樣品可以得到約3-12μgDNA。